Хемилюминесцентный иммуноанализ

Здравоохранение материалы / Экспресс диагностика особо опасных инфекций / Экспресс-диагностика чумы / Хемилюминесцентный иммуноанализ

Новым этапом на пути развития иммунологических методов диагностики ООИ является хемилюминесцентный иммуноанализ — ХЛИА. Преимущество этого метода определяется его высокой чувствительностью, относительной простотой и произ­водительностью, возможностью полной автоматизации

В открытой литературе имеются отдельные сообщения, по­священные применению ХЛИА в медицинской микробиологии, как для обнаружения бактериальных антигенов, так и для поиска специфических антител

Цель нашей работы заключалась в отработке оптимальных условий постановки ХЛИА для ускоренной диагностики ООИ, сравнительной оценке этого теста с общепринятыми реакция­ми — МФА, РПГА и ТИФА.

Объектами исследования служили взвеси возбудителей чу­мы, сапа, мелиоидоза, бруцеллеза и сибирской язвы, обезза­раженные 0,5% формалином, всего 100 штаммов.

Специфичность препаратов и метода контролировали на 42 штаммах близкородственных и гетерологичных микроорга­низмов.

В качестве диагностических препаратов для обнаружения возбудителей чумы, сапа, мелиоидоза, бруцеллеза и сибирской язвы в ТИФА и ХЛИА использовали специфические иммуно-пероксидазные конъюгаты к соответствующим возбудителям ООИ, полученные методом перйодатного окисления на основе иммуноглобулинов из кроли­чьих иммунных сывороток и пероксидазы, рабочее разведение которых составляли соответственно 1:200—1:300 и 1:1000—1:1500.Подготовку и постановку ТИФА и ХЛИА осуществляли общепринятым способом В качестве субстратов использовали: для ТИФА — о-фенилендиамин, для ХЛИА — смесь люминола с перекисью водо­рода и р-йодфенола. Постановку МФА и РПГА проводили по общеизвестной ме­тодике.

Результаты ТИФА и РПГА учитывали визуально, МФА — при помощи люминесцентного микроскопа, ХЛИА — на люминометре.

Чувствительность ХЛИА на 1—2 по­рядка выше, чем ТИФА и на 2—4 порядка превышает чувстви­тельность общепринятых тестов — МФА и РПГА. При этом ме­тод достаточно специфичен.

Хемилюминесцентный анализ при использовании автомати­ческих приборов постановки и учета результатов отличается экономичностью и высокой разрешающей способностью, за­служивает внедрение в практику медицинских и ветеринарных лабораторий.

Специфичность ХЛИА зависит от качества использован­ных иммуноглобулинов. На 42 близкородственных и гетероло-гичных штаммах положительные реакции получены с Y. pseu-doTuberculosis 816111(37°) с чумными общими ИПК и В. sereus 1 и 3 с сибиреязвенными ИПК в концентрациях 1 -106 м. т./мл.

ХЛИА следует рекомендовать для лабораторной диаг­ностики ООИ особенно в тех случаях, когда в исследуемом ма­териале предполагается незначительное содержание возбуди­теля.