Реакция агглютинации мікрометодом

Здравоохранение материалы / Экспресс диагностика особо опасных инфекций / Экспресс-диагностика холеры / Реакция агглютинации мікрометодом

Страница 1

В последнее время в бактериологической практике нашел довольно широкое применение микрообъемный метод постановки серологических реакций с использованием спе­циальных планшеток и микротитровальных игл .

Реакции агглютинации микрометодом ставят с холерны­ми агглютинирующими референс-сыворотками в полистроловых микротитровальных планшетках с плоским или V-образ-ным дном, предназначенных для иммунологических реакций, используются мпкротитровальные планшет­ки с объемом лунок 0,4 мл и в пробирках параллельно. Предва­рительно планшетки тщательно промывfют проточной водой, каждую лунку прополаскивали дистиллированной водой и хо­рошо просушивали, затем делали надписи простым каран­дашом.

Во все лунки четырех рядов пипеткой-капельницей из микротитратора Такачи вносят 0,85% раствор хлористо­го натрия (рН 7,2) в объеме 0,05 мл, затем в первую лунку каждого ряда — того же объема соответствующей сыворотки в разведении 1:25 и проводят ее титрацию микротитроваль-ной иглой с головкой (объем 0,05 мл), удаляя из последней лунки по 0,05 мл.

После титрации сывороток во все лунки, кроме их конт­ролей, вносят 0,05 мл взвеси исследуемой агаровой культуры. Эту манипуляцию про­водят на подносе.

По окончании титрации планшет накрывают крышкой и ставят на подносе в термостат при 37° С. После 2-часовой экспозиции проводят окончательный учет реакции под стереомикроскопом (МБС-1, МБС-2) в косопроходящем свете. При учете реакции крышку с планшетки не снимают, в случае ее запотевания заменяют другой.

После учета реакции планшетку и крышку складывают в кювет и заливают 5'% хлорамином так, чтобы все лунки планшетки были заполнены дезраствором.

Исследования показали, что все холерные вибрионы клас­сического и эльтор биоваров агглютинируются холерной ви­довой 0-сывороткой в микрообъемах.

Что касается агглютинабельности типоспецифическими сы­воротками, то прослеживается следующая закономерность:

при постановке с сывороткой Инаба в микрометоде агглюти­нировались 100, а в пробирках—90% штаммов классического холерного вибриона серовара Инаба. Холерные вибрионы био­вара эльтор серовара Инаба агглютинировались в планшет­ках и пробирках соответственно в 95 и 96% случаев. У холер­ных вибрионов классического и эльтор биоваров серовара Огава соотношения в обеих методиках были практически те же.

Интересен факт, что при постановке реакции агглютинации с RO-сывороткой наибольшее число штаммов, агглютинирующихся RO-сывороткой до титра, было выявлено в микро­методе; в пробирках агглютинация установлена у одного штамма.

Все штаммы вибрионов 040—056 сероваров в микромето­де не агглютинировались холерными агглютинирующими сыворотками, а в пробирках штамм II 258-1099 (040 серовара) агглютинировался всеми холерными сыворотками.

Большинство изученных штаммов представителей семейст­ва Enterobacteraceae также не агглютинировалось холерными агглютинирующими сыворотками, за исключением Sh. flexneri 2503, у которого в пробирках была выявлена агглютина­ция со всеми сыворотками, и штамма S. typhimurium 21, у ко­торого отмечена неспецифическая реакция агглютинации со всеми сыворотками как в пробирках, так и в планшетках.

При пользовании этим методом расход агглютинирующих сывороток уменьшается в 10 раз, значительно сокращается время, необходимое для постановки реакции, и ускоряется срок выдачи ответа. Кроме того, описанный метод менее трудоемок. Таким образом, стандартность, достоверность полученных результатов, высокая экономичность метода позволяют реко­мендовать его при идентификации холерных вибрионов, изуче­нии штаммов и популяции штаммов холерных вибрионов по признаку агглютинабельности.